水产养殖水体弧菌实用检测方法

弧菌实用检测方法
 
一、器材和试剂 (如图A)
     
电炉一台、培养皿（大）10个、100ml量筒1个、移液管1支、酒精灯1个、三角涂布棒1个、三角烧瓶500ml1个、250ml烧杯1个、天平1个、TCBS培养基1瓶、酒精1瓶，棉布2张。

 
二、样品采集 

1、用无毒塑料瓶采集水下约10cm处水样，采好的水样需盖紧瓶。 
2、采得的水样立即送检，否则，应将样品置于冰瓶或冰箱中，但也不得超过24h，否则将影响检验结果。 
 
三、检验步骤 

1、倒平板  (如图B)


1） 称量100克TCBS弧菌琼脂粉和1000ml冷却开水，倒入三角烧杯中，加热搅拌，溶解琼脂粉，直至沸腾。 
2）在灭菌操作台上，将沸腾后的培养基冷却到50~60℃，分别倒人经灭菌的各培养皿中，每个培养皿约10~12mL，待其冷却凝固，倒置于无菌泡沫箱内保存备用。 
注意：倒好的平板内不能有水珠或水层。 
 
2、菌液接种  (如图C)

在灭菌操作台上，取水样（可稀释）0. 05mL，滴入制好的培养皿培养基上，用灭菌的三角涂布棒将菌液涂抹均匀，平放于操作台上数分钟，使菌液渗入培养基。 

3、弧菌培养  (如图D)

将接种培养皿倒置灭菌泡沫箱内培养20小时左右，取出计数菌落。

4、菌落计数  (如图E)

分别点数绿色菌落和黄色菌落数量，乘取水样的稀释倍数，即可得该水样的绿色和黄色弧菌总数。

5、废物处理 (如图F)
  
经计数后不用的培养基，需经灭菌煮溶后，方可到人排水沟。
经常性检测虾塘水体的弧菌密度。要求总弧菌的密度控制在5000菌株/毫升以下，绿弧菌的密度控制在300菌株/毫升以下。